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标记芯片:生物素标记的RNA探针20-30ug/ml,溶解在DEPC水配置的PBS或水中 200ul注入OpenSPR固定的到链霉亲和素芯片200ul注入OpenSPR固定的到链霉亲和素芯片表面
检测芯片:耐药细菌总DNA(200ug/ml –1mg/ml)200ul 注入仪器过芯片(5min) 摸索再生缓冲液: 用不同溶度NaOH(1mM-10mM)洗脱与探针结合的核酸(1-2min),并收集洗脱下来的与配体结合的核酸 检测再生后的芯片:再次通过不同溶度梯度的耐药细菌总DNA,检测配体是否经过碱处理后失效。
扩增:
通过PCR将不同溶度再生缓冲液收集起来的核酸进行特异扩增 鉴定:
跑胶回收然后测序鉴定
注意事项:
如果考虑到RNA降解的因素的话,可以考虑用肽核酸代替,这样有助于芯片的再次利用,肽核酸不会影响核酸之间的碱基互补配对。
一种抗性菌的预实验,包括设计引物,跑pcr检测,摸索各种条件,整体收费5000.00元整; 实验条件成熟后,包被探针并检测,提供洗脱条件,一张芯片2000.00元整。 以上报价根据实验具体情况,再协商。
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